高效液相色谱法测定复方肝泰乐胶囊中维生素B1、维生素B2、烟酰胺和苯巴比妥含量(2)
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参见附件。
取维生素B1对照品11.44 mg、维生素B2对照品5.23 mg、烟酰胺对照品25.65 mg、苯巴比妥对照品60.00 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加37%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备溶液；精密称取混合对照品储备溶液5 mL，置50 mL量瓶中，加37%乙腈稀释至刻度摇匀，作为混合对照品溶液。
复方肝泰乐胶囊取10粒，取2粒混合研细粉，置100 mL磨口锥形瓶中，加37%乙腈50 mL，精密称重，超声15 min，擦干瓶壁，精密称定，摇匀过滤后作为供试品溶液。另采用同样方法制备不含维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥的复方肝泰乐胶囊的阴性供试品溶液。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent-Dos分析色谱柱(150 mm×4.6 mm，4.6 μm)。流动相A：乙腈-水-三乙胺(100∶900∶1，含0.01 mol/庚烷磺酸钠，用冰醋酸调pH值为3.6)；流动相B：乙腈。洗脱程序：0～12 min，A 100%～70%；12～200 min，A 70%；流速1 mL/min，检测波长260 nm。
2.2 系统适用性试验
2.2.1 理论板数和分离度在上述色谱条件下，取混合对照品溶液，复方肝泰乐胶囊阴性样品和复方肝泰乐胶囊供试液各10 μL，分别进样，记录色谱图，见图1。
A混合对照品溶液；B阴性样品；C对照品溶液；1维生素B1；2维生素B2；3烟酰胺；4苯巴比妥
2.2.2 精密度试验。取维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥混合对照品溶液重复进样5次，记录色谱峰面积，RSD分别为0.09%、0.09%、0.09%和0.08%。
2.3 重复性试验按样品测定方法
制备3个供试品溶液(含量分别相当供试品溶液浓度的80%、100%和120%，各浓度重复制备3份)，分别测定含量[7-9]。维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥含量的RSD分别为0.13%、0.17%、0.11%和0.09%。
2.4 线性关系
取维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥混合对照品溶液(每1毫升含维生素B1 22.88 μg、维生素B2 10.46 μg、烟酰胺51.30 μg、苯巴比妥120.00 μg)，置自动进样器中，分别取2、4、8、10、24 μL进样，记录色谱峰面积，以峰面积对进样量(μg)线性回归，维生素B1回归方程：y = 186.83 x+ 17.85，线性范围：0.053 32～0.344 40 μg，r = 0.999 9；维生素B2回归方程：y = 402.47 x + 12.54，线性范围：0.025 11～0.199 80 μg，r = 0.999 9；烟酰胺回归方程：y = 58.314 1 x + 206.8，线性范围：0.164 1～1.265 0 μg，r = 0.999 1；苯巴比妥回归方程：y = 165.4 x + 181.2，线性范围：0.522 1～2.003 0 μg，r = 0.999 5。
2.5 定量限
混合对照品溶液，用37%乙腈稀释至峰高约为基线噪音的10倍进样，测得维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥、肝泰乐泮的定量限均小于0.01 μg。
2.6 加样回收率按照本品处方
分别制备含量相当于标示量80%、100%和120%的样品，按含量测定项下方法每个样品各测定3次，计算回收率。回收率测定结果见表1、2、3、4。
2.7 耐用性
2.7.1 供试品溶液稳定性配制供试品溶液，10 h内重复进样测定6次，维生素B1、维生素B2、烟酰胺、苯巴比妥含量的RSD均不大于0.50%，显示供试品溶液至少在10 h内稳定。
2.7.2 流动相的组成比例和pH在研究分析方法的过程中可以看出，流动相中有机相和水相的比例有小的变动(1%变化)、pH值在3.0～4.0范围变动，对测定结果无明显影响。
2.8 含量测定
按照上述方法制备混合对照品溶液和供试品溶液，分别取对照品溶液和供试品溶液各10 μL进样测定，外标法以峰面积计算。测定了3批复方肝泰乐胶囊的含量，结果见表5。
3 讨论
水溶性维生素在272 nm波长处有最大吸收，其中维生素B1和维生素B2在此波长为吸收值变化比较平缓的肩部，此波长下苯巴比妥含量及其吸收值相对较低，所以以外标法计算结果，水溶性维生素以内标法计算结果[10-13]。
本方法精密度、准确度好，操作简便，可用于复方肝泰乐胶囊中维生素B1、维生素B2、烟酰胺和苯巴比妥含量的测定。
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